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【瑞士步琦】噴霧干燥制備鼠李糖乳桿菌微膠囊研究

噴霧干燥技術(shù)微囊化鼠李糖乳桿菌ATCC 7469


益生菌是一種活的微生物,當(dāng)攝入足夠的量時(shí)會(huì)對(duì)健康有益,只有在生存能力(107-1010 CUF m/L)得到保護(hù)的情況下才能發(fā)揮其作用。益生菌通常是乳桿菌和雙岐桿菌,它們常與胃腸道有關(guān);它們通常以凍干培養(yǎng)物的形式供應(yīng),或者被霧化并直接添加到食物中。益生菌功能食品在市場(chǎng)上需求量很大,酸奶和發(fā)酵乳制品通常被用作這類生物活性微生物的載體;然而,人們對(duì)在其他類型的非乳制品基質(zhì)中摻入益生菌菌株越來越感興趣,尤其是對(duì)于患有乳糖不耐受癥、對(duì)酪蛋白過敏或與乳制品有關(guān)的其它問題的消費(fèi)者。一些研究報(bào)告了微膠囊益生菌的應(yīng)用。例如,將益生菌菌株摻入奶酪、巧克力涂層和巧克力中,以及摻入果汁、蛋黃醬、黃油、肉類和烘焙產(chǎn)品等非乳制品中。益生菌菌株對(duì)胃腸道健康很重要,因?yàn)樗鼈兛梢灶A(yù)防腸道炎癥,為上皮細(xì)胞提供保護(hù),并調(diào)節(jié)抗體。它們可以產(chǎn)生細(xì)胞因子或趨化因子,改善乳糖不耐受,增加對(duì)結(jié)直腸癌的保護(hù),抑制幽門螺桿菌活性,并用于治療食物過敏和預(yù)防急性腹瀉。然而,這些微生物有不幸的缺陷,特別是在菌株存活方面。噴霧干燥是微膠囊化廣泛使用的方法之一,因?yàn)槠涑杀镜停谧罴迅稍飾l件下具有高存活率,并且在配方中加入了保護(hù)劑。近年來,乳清蛋白作為益生菌保護(hù)劑的使用獲得了越來越多的興趣,因?yàn)檫@些蛋白是提高益生菌活性的天然載體,并且由于結(jié)構(gòu)和理化特征,可以作為胃腸道中的遞送系統(tǒng)。蛋白質(zhì)可以在干燥過程中增加益生菌的存活率,因?yàn)樗鼈兡軌蛐纬山档蜔釕?yīng)力的保護(hù)膜。糖的添加也會(huì)影響干燥的益生菌制劑的存活。研究人員肯定了糖(如肌醇、山梨醇、果糖、乳糖、葡萄糖和海藻糖)對(duì)脫水細(xì)菌細(xì)胞的保護(hù)作用。研究發(fā)現(xiàn),海藻糖等糖是一種能夠通過氫鍵與蛋白質(zhì)分子相互作用的二糖;它可以在脫水和再水化過程中替代蛋白質(zhì)周圍的水分子,形成一種玻璃狀基質(zhì),穩(wěn)定生物大分子??茖W(xué)家研究了使用奶酪乳清與淀粉、阿拉伯膠、麥芽糖糊精和乳清蛋白濃縮物聯(lián)合干燥鼠李糖乳桿菌 64 的載體劑選擇。


另一方面,干燥溫度是影響存活率的因素。例如,噴霧干燥的植物乳桿菌 WCFS1 再低干燥溫度下表現(xiàn)出較高的存活率。在此背景下,本研究以 WPC、麥芽糊精和海藻糖為原料,采用噴霧干燥的方法對(duì)鼠李糖乳桿菌 ATCC 7469 進(jìn)行微囊化,并評(píng)估微囊化對(duì)細(xì)胞活力和干粉性能的影響。以噴霧干燥條件(包括進(jìn)口溫度、空氣流量和進(jìn)料泵)為自變量,益生菌存活率、水分含量、水分活性和有效產(chǎn)量為因變量。采用響應(yīng)面法對(duì)噴霧干燥包裹的鼠李糖乳桿菌的存活率進(jìn)行了優(yōu)化,并對(duì)粉末的穩(wěn)定性進(jìn)行了評(píng)估。


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樣品制備

按最佳穩(wěn)定性配方乳清濃縮蛋白:麥芽糊精:海藻糖(75:10:15)的比例采用超濾的方法制備乳制品懸浮液。


將凍干的鼠李糖乳桿菌 ATCC 7469 菌株懸浮于 2ml 培養(yǎng)基中,在 MRS 肉湯(蛋白胨:10.0g,牛肉浸粉:10.0g,酵母浸粉:5.0g,葡萄糖:20.0g,吐溫80:1.0g,磷酸氫二鉀:2.0g,醋酸鈉:5.0g,檸檬酸銨:2.0g,硫酸鎂:0.1g,硫酸錳:0.05g,pH6.2±0.2,25℃)中重新激活制備細(xì)菌懸浮液。


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實(shí)驗(yàn)過程

在磁力攪拌下將鼠李糖乳桿菌 ATCC 7469 菌株懸浮液添加到每個(gè)乳懸浮液中,在微囊化過程期間使所述分散液保持在恒定的攪拌狀態(tài)。噴霧干燥儀選用瑞士步琦 B-290,通過改變進(jìn)口溫度(120℃-180℃)、干燥空氣流量(70%-90%,即:28-35m3/h)和進(jìn)料量(10%-55%,即 3-17mL/min)來進(jìn)行工藝摸索。


S-300


工藝探索采用響應(yīng)面法和二次復(fù)合中心設(shè)計(jì)對(duì)益生菌微囊化進(jìn)行了優(yōu)化,其自變量有進(jìn)口溫度、空氣流速和進(jìn)料流量。在理論條件下進(jìn)行了三次實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。



圖1 考察了菌株存活率的響應(yīng)面變化。由圖可知存活率與出口溫度呈反比,低溫時(shí)存活率在 69%、高溫時(shí)存活率在 23%。其他科學(xué)家在使用含益生元的脫脂乳制備鼠李糖乳桿菌 GG(ATCC 53,103),70℃ 時(shí)的存活率為 76%。也跟我們的研究結(jié)果相吻合。



圖2 考察了水分含量的響應(yīng)面變化。從圖可得到進(jìn)口溫度與水分含量之間呈反比關(guān)系,當(dāng)進(jìn)口溫度與進(jìn)料量較高時(shí),粉末的水分含量較低,結(jié)合存活率考慮,水分含量在 3.0%-5.8% 之間,與其他報(bào)道的數(shù)值相接近。



圖3 考察了水活度的響應(yīng)面變化。在較高的進(jìn)口溫度下,進(jìn)料量和氣體流量得到了較低的水活度值,因素與結(jié)果之間呈反比關(guān)系。其他使用麥芽糊精、乳清蛋白濃縮物和葡萄糖的相關(guān)研究中,水活度的值與本研究中活性最高的粉末報(bào)告結(jié)果一致。


3

實(shí)驗(yàn)結(jié)果


確定益生菌的包封中壁材的最佳比例對(duì)于提高微生物對(duì)抗整個(gè)胃腸道條件的穩(wěn)定性很重要。在干燥過程中最佳條件以最大限度地提高作為壁材的蛋白質(zhì)-海藻糖-麥芽糊精混合物的保護(hù)能力并因此提高鼠李糖的存活值也是重要的。因此,使用響應(yīng)面方法確定干燥過程的最佳條件。表2顯示了鼠李糖乳桿菌微囊化的最佳操作參數(shù),結(jié)果表明,理論模型可以很好地近似實(shí)驗(yàn)值(差異<10%)。


得到的最佳噴霧干燥條件是進(jìn)口溫度、空氣流量和進(jìn)料泵流量分別為169℃、33m3/h和16ml/min,存活率為70%,吸氣率為84%,出口溫度為52℃,總體滿意度為0.96。



物理性質(zhì)評(píng)價(jià)如圖4所示,得到的粉末水活性動(dòng)力學(xué)顯示了較高的吸水能力,這可能是海藻糖作為低分子量碳水化合物,表現(xiàn)出的分子運(yùn)動(dòng)和擴(kuò)散效應(yīng),與用于包封基質(zhì)的典型吸水行為一致。吸濕性隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)有增加的趨勢(shì),直到達(dá)到某種程度的平衡。因此加入了 WPC 來降低吸濕性,因?yàn)樗谋砻婊钚院托纬删哂休^高 Tg 膜的能力。



粒徑和形態(tài)結(jié)果如圖5顯示。(a)在最佳工藝參數(shù)上制備的粉體,其微膠囊緊湊,類球形形狀,具有不同的大小和不規(guī)則的表面與壓痕,外表面顯示無裂縫或破壞的墻壁,這是確保更高的保護(hù)和更低的氣體滲透性的基礎(chǔ)。


4

結(jié)論

結(jié)果表明,蛋白質(zhì)-海藻糖-麥芽糊精混合物是包裹鼠李糖乳桿菌的良好壁材,在干燥過程中表現(xiàn)出重要的熱保護(hù)作用,并提高了其存活率;通過響應(yīng)面方法優(yōu)化的噴霧干燥工藝條件生產(chǎn)的微膠囊具有可接受的理化性質(zhì)——水分、水活性、吸濕性和粒徑等,為益生菌的微囊化提供了思路。


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文獻(xiàn)來源

Microencapsulation of Lactobacillus rhamnosus ATCC 7469 by spray drying using maltodextrin, whey protein concentrate and trehalose.




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